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如何使用ImageJ进行细胞荧光定量

ImageJ是功能十分强大的图像分析软件,这里主要介绍ImageJ软件测量细胞累积荧光强度的具体操作流程。 软件下载安装 后台回复200512获取网盘下载链接,下载后解压,软件为免…

ImageJ是功能十分强大的图像分析软件,这里主要介绍ImageJ软件测量细胞累积荧光强度的具体操作流程。

软件下载安装

  • 后台回复200512获取网盘下载链接,下载后解压,软件为免安装版,将解压后的文件夹移动到想要安装的位置即可,然后双击下图红框中的文件打开软件(可将该文件发送快捷方式到桌面,方面下次打开)。

荧光强度测量

打开图片

  • 点击File→Open,打开要测量的荧光图片;如果直接用file-open的方法打不开图像,点住图片,鼠标左键按住不放,拖到ImageJ工具栏里,直到鼠标指针下方出现虚线框,放开左键,图像就打开了;

转换图片格式

  • 在工具栏依次点击Image→Type→16-bit;

设置需要测量的参数

  • 依次点击Analyze→Set Measurements;

  • 如下图所示,勾选测量对象:①面积(Area),②平均灰度值(Mean),③累积光密度(IntDen),然后点击OK;

打开ROI窗口

  • 依次点击Analyze→Tools→ROI Manger;

在荧光图上选择测量对象(带荧光的细胞以及背景)并计算

  • 点击主界面的套索工具;

  • 点击已打开的荧光图,用套索工具在图上圈出一个荧光细胞的轮廓;

  • 在ROI Manger界面点击Add,框2会出现一个对象,点击选中后点Rename,重命名对象。此例中按顺序重命名为1,点击OK;

  • 按照上一步的方法继续使用套索工具在荧光图上勾选多个测量对象,并按顺序命名,此例中勾画了六个待测荧光细胞对象和三个背景对象,背景对象用于后续扣除背景值;

  • 勾画完对象后,在ROI Manger界面中,按shift键选中所有测量对象,然后点击Measure;

  • 点击Measure后,即弹出Results框。

整理数据

  • 将得到的结果拷贝到Excel表中,求出背景7、8、9的平均光密度,再求出校正后的累积光密度(校正后的累积光密度=累积光密度-待测细胞面积*背景平均光密度);

  • 介绍完毕。

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作者: oncolab

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