首先，研究人员评估了来自黑色素瘤皮肤转移的样本和数据，发现MHC-I下调相对常见，并且与CD8⁺ T细胞缺乏和对免疫检查点阻断反应差相关。同时，MHC-II几乎总是局限于浸润边缘的基质细胞和抗原提呈免疫细胞，并且与浸润的CD8^＋T细胞相关。

为了直接研究CD4⁺和CD8⁺ T细胞在肿瘤中的行为，研究人员荧光标记了靶向TRP-1的CD4^＋T细胞和靶向Pmel-1的CD8⁺ T细胞。然后将这些细胞过继转移到化疗预处理的B16黑色素瘤荷瘤小鼠（内源性表达两种靶表位）体内，同时给这些小鼠注射编码Pmel/gp100-TRP-1融合蛋白的基于腺病毒的疫苗以及polyI:C和CpG佐剂。与CD8^＋ T细胞相比，CD4^＋T细胞扩增的效率要低得多，但同样具有根除已建立肿瘤的能力。化疗预处理和固有免疫刺激剂对于抗肿瘤疗效至关重要，有助于转移性和内源性CD4^＋T细胞向TH1表型分化，并防止Treg聚集。ACT（细胞过继转移）和固有免疫刺激各自独立地增加了髓系免疫浸润(主要由单核细胞和巨噬细胞组成)，并且两者联合对单核细胞聚集的作用更强。

由于大多数人类黑色素瘤细胞不表达MHC-II，因此研究人员下一步研究了靶向 TRP-1的CD4^＋T细胞是否可以控制Ciita敲除((MHC-II缺陷)的HCmel12肿瘤。在体外实验中，靶向TRP-1的CD4^＋T细胞能够以抗原特异性方式直接对表达MHC-II的HCmel12细胞产生应答，但被负载HCmel12细胞裂解物的MHC-II树突状细胞间接激活的效率更高。在体内实验中，只要TRP-1表达，靶向TRP-1的CD4^＋T细胞就能清除MHC-II缺陷的肿瘤。虽然在TRP-1异质表达的MHC-II缺陷肿瘤中观察到一些旁观者杀伤，但Trp1-KO细胞的生长并不能完全得到控制。

考虑到HCmel12细胞在暴露于IFNs后仅表达MHC-I和MHC-II，研究人员生成了Jak1-KO HCmel12细胞，以干扰IFN信号传导和MHC表达，并在隔离状态下研究CD4^＋T细胞的影响。当NK细胞被清除，并且没有CD8^＋T细胞活性时，过继转移的靶向TRP-1的CD4^＋T细胞能单独清除已建立的肿瘤。在这一IFN无应答、MHC缺陷的模型中，靶向TRP-1的CD4 T细胞和Pmel-1 CD8^＋T细胞均显著增加了肿瘤中的髓系细胞数量，但与对照肿瘤相比，Jak1-KO肿瘤中增加的免疫细胞浸润不太明显。在OVA作为靶抗原的OT-I和OT-II模型中观察到了类似的结果。

接下来，Kruse、Buzzai、Shridhar和Braun等人提出，在肿瘤组织中，CD4效应T细胞可能被MHC-II抗原提呈细胞激活，而CD8^＋T细胞需要被肿瘤细胞上的MHC-I限制性抗原激活。这种效应通过对酪氨酸激酶敲除肿瘤的成像得到了证实。在对照Tyr-KO肿瘤中，侵袭边缘存在少量的CD4^＋T细胞，而侵袭边缘和肿瘤中心均有大量CD8^＋T细胞浸润。在MHC缺失的肿瘤中，侵袭边缘再次检测到低数量的CD4＋T细胞和高数量的CD8^＋T细胞，但CD8^＋T细胞保持高度运动性，没有在肿瘤中心聚集。基于OVA的肿瘤免疫模型也观察到了类似的结果。

在携带标记抗原呈递细胞的小鼠中使用荧光标记的Tyr-KO HCmel12肿瘤细胞，研究人员能够观察到标记的CD4^＋T细胞在肿瘤浸润边界内停止并优先与标记的MHC-II抗原呈递细胞结合。位于CD4^＋T细胞附近的抗原提呈免疫细胞只上调MHC-II的表达，这与CD4^＋T细胞已被局部激活并分泌IFNγ的观点一致。在Trp1-KO肿瘤中或使用MHC-II阻断时，未观察到这些效应，提示它们是以抗原识别依赖的方式发生。

为了更好地理解如此少的CD4^＋T细胞如何能如此强地控制肿瘤生长，研究人员评估了来自未接受治疗的小鼠和接受CD4 ACT方案治疗的小鼠的CD11b⁺ Ly6G^–肿瘤浸润单核吞噬细胞。这项评估表明治疗后IFN应答基因被强烈激活，并且流入的未成熟单核细胞转变为更多的IFN激活的单核/巨噬细胞状态，包括MHC-II抗原提呈、iNOS表达和肿瘤杀伤状态。此外，CD4^＋T细胞与固有免疫刺激物表现出协同作用，这一效应是由于CD4^＋T细胞产生IFNγ，从而促进了iNOS表达和单核细胞的肿瘤杀伤效应。

在研究TME中究竟哪些因素导致了肿瘤细胞死亡时，研究人员发现，iNOS对于Jak1-KO (IFN无应答，MHC缺陷)HCmel12肿瘤的抗肿瘤疗效至关重要，而对于Ciita-KO (IFN有应答，MHC-II缺陷)肿瘤则并非如此。与中性粒细胞相比，CCR2单核细胞在这一抗肿瘤作用中更重要，表明表达iNOS的单核细胞和巨噬细胞在其中发挥重要作用。研究了最近描述的由IFNγ、TNF和一氧化氮协同作用驱动的炎症细胞死亡模式，研究人员发现，在体外，一氧化氮供体SNAP有效地诱导了Ciita-KO (IFN应答)和Jak1-KO (IFN无应答)HCmel12细胞死亡。同时，IFNγ和TNF的联合作用仅足以对抗Ciita-KO (ifn -应答)的HCmel12细胞。在人类细胞中也观察到类似的结果，支持以下假设：在IFN反应性黑色素瘤中，IFNγ使细胞对TNF诱导的细胞死亡敏感，而在IFN无反应性黑色素瘤中，髓系细胞来源的一氧化氮促进了有效的炎症性细胞死亡。

总体而言，这些发现提示，在预处理和固有免疫刺激的支持下，相对较少的CD4^＋T细胞可消除MHC缺陷、IFNγ无反应的肿瘤，否则这些肿瘤就会逃避CD8 T细胞的检测。这一效应是基于肿瘤浸润边缘的抗原提呈细胞激活CD4^＋T细胞，继而产生IFNγ，导致单核/巨噬细胞重编程和炎症性细胞死亡。

本周，共同第一作者巴斯蒂安·克鲁斯和安东尼·布扎伊回答了我们的问题。

当我们观察到极少数CD4^＋T细胞可以控制对IFN无反应的肿瘤时，第一个令人惊讶的结果出现了，这些肿瘤抵抗了CD8^＋T细胞免疫。当时，我们并不了解CD4^＋T细胞如何如此有效地控制这些肿瘤，这导致我们发现CD4^＋T细胞的空间分布与CD8^＋T细胞有本质上的不同。这给我们带来了第二个惊人的发现，即CD4^＋T细胞并没有渗透到肿瘤组织中，而是通过与募集的髓系细胞相互作用，从外至内远程根除黑色素瘤。

我们希望进一步探索CD4^＋T细胞和固有免疫刺激物如何协同控制肿瘤，因为它们之间的相互作用如何使癌细胞对死亡敏感还不完全清楚。我们希望我们的研究结果能够使CD4^＋T细胞成为关注的焦点，从而进一步研究其在抗肿瘤免疫中的作用。我们相信利用CD4^＋T细胞的效应功能将在未来使癌症患者受益。

BK：我最近了解到，每个逆戟鲸都有自己的叫声来识别彼此。海洋生物学家认为这些独特的叫声就是它们的名字。

ACB：在牌局中，你应该只玩20%的起始手牌……这是我来之不易的教训。